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p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

【作者】 胥可 [1] 贾强 [2] 张娟 [2] 陈艳芹 [2] 邵华 [2] 凌晓斐 [1] 张振玲 [2] 于功昌

【关键词】 多菌灵 支持细胞 p38 MAPK 细胞周期 细胞凋亡

摘要】目的 通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用.方法 将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20 μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10 μmol/L SB203580+5 μmol/L多菌灵溶液染毒48h,采用CCK-8法检测细胞存活率.将TM4细胞分别暴露于O(对照)、5 μmol/L多菌灵溶液和10 μmol/L SB203580抑制剂溶液及10 μmol/LSB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P<0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势.与5 μmol/L多菌灵组比较,10 μmol/L SB203580+5 μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P<0.01);而10 μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变.与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.01);而10 μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变.与5 μmol/L多菌灵组比较,10 μmol/L SB203580+5 μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,5 μmol/L多菌灵组TM4细胞G1/Go期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P<0.01);而10 μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变.与5μmol/L多菌灵组比较,10 μmol/LSB203580+5 μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);而10 μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变.与5μmol/L多菌灵组比较,10 μmol/L SB203580+5 μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.01).各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤.

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