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微囊藻毒素-LR诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化

【作者】 朱雪凤 [1] 农清清 [1] 范誉 [2] 李江恒 [2] 贾雪姣 [2] 费梦雪 [2] 马智星 [2] 黄秋月

【关键词】 微囊藻毒素-LR 细胞恶性转化 miRNA WRL68细胞

摘要】目的 构建微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)诱导的人永生化肝细胞株(WRL68细胞)恶性转化模型,检测miRNA表达谱,寻找差异表达的rniRNA.方法 用10 nmol/L MC-LR对WRL68细胞进行连续染毒至第25代,进行软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤实验.通过miRNA芯片技术检测和分析对照WRL68细胞和恶性转化细胞的miRNA表达谱;采用实时荧光定量PCR对芯片结果加以验证;应用TargetScan在线软件预测miRNA可能调控的靶基因.结果 第25代MC-LR染毒组细胞在软琼脂中可以形成集落,能在裸鼠皮下形成肿瘤.芯片检测分析显示,表达差异显著的miRNA有54个,表达上调有35个,表达下调有19个.实时荧光定量PCR结果显示,hsa-miR-140-3p、hsa-miR-19b-1-5p、hsa-miR-203a和hsa-miR-494均下调(P<0.05),与芯片检测结果趋势一致.以生物信息学技术分析miR-494可能调控的靶基因,结果预测到3个与肿瘤相关的潜在靶基因,分别是肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)、微管相关肿瘤抑制基因(microtubule associated tumor suppressor1,MTUS1)和结肠癌转移相关基因(metastasis associated in colon cancer1,MACC1).结论 MC-LR诱导肝细胞恶性转化过程中可引起miRNA表达谱发生显著改变,差异表达的miRNA可能在肝细胞恶性转化过程中起着重要作用.

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